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RNA提取試劑盒是如何使用的呢?

 更新時(shí)間:2021-11-25 點(diǎn)擊量:789
 
  RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解樣品后,加入氯仿,溶液分為無(wú)色水相和粉紅色有機(jī)相,RNA在水相中;用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比,該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專一性強(qiáng),應(yīng)用范圍廣。
  RNA提取試劑盒使用方法:將0.5mL結(jié)合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中,放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結(jié)合液,轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中,顛倒混勻數(shù)次,離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5mL結(jié)合液,混勻后4℃200g離心5分鐘,小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次,用RNase-free水洗脫mRNA,用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。
  RNA提取試劑盒具有下列特點(diǎn):
  1、直接從總RNA中提取RNA,即開即用,非常方便。
  2、處理量大,一次可以處理10μg總RNA。
  3、操作簡(jiǎn)單,只需要離心就可以完成,免去了灌柱、洗柱等麻煩。
  4、得到的RNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
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